অস্টিওআর্থারাইটিস (OA) হল দীর্ঘমেয়াদী দীর্ঘস্থায়ী ক্ষয়িষ্ণু হাড়ের জয়েন্টের রোগগুলির মধ্যে একটি যা 65 বছরের বেশি বয়সী জনগোষ্ঠীকে প্রভাবিত করে [
1]। সাধারণত, OA রোগীদের ক্ষতিগ্রস্ত তরুণাস্থি, স্ফীত সাইনোভিয়াম এবং ক্ষয়প্রাপ্ত কনড্রোসাইট ধরা পড়ে, যা ব্যথা এবং শারীরিক কষ্টের কারণ হয় [
2]। আর্থ্রাইটিস ব্যথা মূলত প্রদাহের কারণে জয়েন্টগুলোতে তরুণাস্থির ক্ষয়জনিত কারণে হয় এবং যখন তরুণাস্থি গুরুতরভাবে ক্ষতিগ্রস্ত হয় তখন হাড়গুলি একে অপরের সাথে সংঘর্ষে লিপ্ত হতে পারে যার ফলে অসহনীয় ব্যথা এবং শারীরিক কষ্ট হতে পারে [
3]। ব্যথা, ফোলাভাব এবং জয়েন্টের শক্ত হয়ে যাওয়ার মতো লক্ষণগুলির সাথে প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারীদের জড়িত থাকার বিষয়টি সুপরিচিত। OA রোগীদের ক্ষেত্রে, প্রদাহজনক সাইটোকাইন, যা তরুণাস্থি এবং সাবকন্ড্রাল হাড়ের ক্ষয় ঘটায়, সাইনোভিয়াল তরলে পাওয়া যায় [
4]। OA রোগীদের সাধারণত দুটি প্রধান অভিযোগ থাকে তা হল ব্যথা এবং সাইনোভিয়াল প্রদাহ। অতএব, বর্তমান OA থেরাপির প্রাথমিক লক্ষ্য হল ব্যথা এবং প্রদাহ কমানো। [
5]। যদিও অ-স্টেরয়েডাল এবং স্টেরয়েডাল ওষুধ সহ উপলব্ধ OA চিকিৎসাগুলি ব্যথা এবং প্রদাহ কমাতে কার্যকারিতা প্রমাণিত করেছে, তবুও এই ওষুধগুলির দীর্ঘমেয়াদী ব্যবহারের ফলে হৃদরোগ, গ্যাস্ট্রো-অন্ত্র এবং কিডনির কর্মহীনতার মতো গুরুতর স্বাস্থ্যগত পরিণতি হতে পারে [
6]। সুতরাং, অস্টিওআর্থারাইটিসের চিকিৎসার জন্য কম পার্শ্বপ্রতিক্রিয়া সহ আরও কার্যকর ওষুধ তৈরি করতে হবে।
নিরাপদ এবং সহজলভ্য হওয়ার কারণে প্রাকৃতিক স্বাস্থ্য পণ্যগুলি ক্রমশ জনপ্রিয় হয়ে উঠছে [
7]। ঐতিহ্যবাহী কোরিয়ান ওষুধগুলি আর্থ্রাইটিস সহ বেশ কয়েকটি প্রদাহজনক রোগের বিরুদ্ধে কার্যকারিতা প্রমাণিত করেছে [
8]। অকল্যান্ডিয়া লাপ্পা ডিসি তার ঔষধি গুণাবলীর জন্য পরিচিত, যেমন ব্যথা উপশম এবং পেট প্রশমিত করার জন্য কিউই সঞ্চালন বৃদ্ধি করে, এবং ঐতিহ্যগতভাবে প্রাকৃতিক ব্যথানাশক হিসেবে ব্যবহৃত হয়ে আসছে [
9]। পূর্ববর্তী প্রতিবেদনগুলি থেকে জানা যায় যে A. lappa-তে প্রদাহ-বিরোধী উপাদান রয়েছে [
10,
11], ব্যথানাশক [
12], ক্যান্সার প্রতিরোধী [
13], এবং গ্যাস্ট্রোপ্রোটেক্টিভ [
14] প্রভাব। A. lappa এর বিভিন্ন জৈবিক ক্রিয়াকলাপ এর প্রধান সক্রিয় যৌগগুলির দ্বারা সৃষ্ট: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone এবং costuslactone [
15]। পূর্ববর্তী গবেষণায় দাবি করা হয়েছে যে লিপোপলিস্যাকারাইড (LPS) তে কস্টুনোলাইড প্রদাহ-বিরোধী বৈশিষ্ট্য দেখিয়েছিল, যা NF-kB এবং তাপ শক প্রোটিন পথ নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে ম্যাক্রোফেজগুলিকে প্ররোচিত করেছিল [
16,
17]। তবে, কোনও গবেষণায় OA চিকিৎসার জন্য A. lappa-এর সম্ভাব্য কার্যকলাপ তদন্ত করা হয়নি। বর্তমান গবেষণায় (মনোসোডিয়াম-আয়োডোএসিটেট) MIA এবং অ্যাসিটিক অ্যাসিড-প্ররোচিত ইঁদুর মডেল ব্যবহার করে OA-এর বিরুদ্ধে A. lappa-এর থেরাপিউটিক প্রভাব তদন্ত করা হয়েছে।
মনোসোডিয়াম-আয়োডোএসিটেট (MIA) প্রাণীদের ব্যথার আচরণ এবং OA-এর প্যাথোফিজিওলজিক্যাল বৈশিষ্ট্য তৈরিতে বিখ্যাতভাবে ব্যবহৃত হয় [
18,
19,
20]। হাঁটুর জয়েন্টগুলোতে ইনজেকশনের সময়, MIA কনড্রোসাইট বিপাককে ব্যাহত করে এবং প্রদাহ এবং প্রদাহজনক লক্ষণগুলি, যেমন তরুণাস্থি এবং সাবকন্ড্রাল হাড়ের ক্ষয়, OA এর প্রধান লক্ষণগুলি প্ররোচিত করে [
18]। অ্যাসিটিক অ্যাসিডের মাধ্যমে সৃষ্ট লেখার প্রতিক্রিয়াকে ব্যাপকভাবে প্রাণীদের পেরিফেরাল ব্যথার অনুকরণ হিসাবে বিবেচনা করা হয় যেখানে প্রদাহজনক ব্যথা পরিমাণগতভাবে পরিমাপ করা যেতে পারে [
19]। মাউস ম্যাক্রোফেজ কোষ লাইন, RAW264.7, প্রদাহের প্রতি কোষীয় প্রতিক্রিয়া অধ্যয়নের জন্য জনপ্রিয়ভাবে ব্যবহৃত হয়। LPS দিয়ে সক্রিয় হওয়ার পরে, RAW264 ম্যাক্রোফেজ প্রদাহজনক পথ সক্রিয় করে এবং TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS এবং IL-6 এর মতো বেশ কয়েকটি প্রদাহজনক মধ্যস্থতাকারী নিঃসরণ করে [
20]। এই গবেষণায় MIA প্রাণী মডেল, অ্যাসিটিক অ্যাসিড-প্ররোচিত প্রাণী মডেল এবং LPS-সক্রিয় RAW264.7 কোষে OA-এর বিরুদ্ধে A. lappa-এর অ্যান্টি-নোসিসেপটিভ এবং অ্যান্টি-ইনফ্ল্যামেটরি প্রভাব মূল্যায়ন করা হয়েছে।
2. উপকরণ এবং পদ্ধতি
২.১. উদ্ভিদ উপাদান
পরীক্ষায় ব্যবহৃত A. lappa DC. এর শুকনো মূলটি Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (সিউল, কোরিয়া) থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল। গ্যাচোন বিশ্ববিদ্যালয়ের কোরিয়ান মেডিসিনের কর্নেল, ভেষজ ফার্মাকোলজি বিভাগের অধ্যাপক ডংহুন লি এটি সনাক্ত করেছিলেন এবং ভাউচারের নমুনা নম্বরটি 18060301 হিসাবে জমা দেওয়া হয়েছিল।
২.২. এ. লাপ্পা নির্যাসের এইচপিএলসি বিশ্লেষণ
A. lappa একটি রিফ্লাক্স যন্ত্রপাতি (পাতিত জল, 100 °C তাপমাত্রায় 3 ঘন্টা) ব্যবহার করে নিষ্কাশিত করা হয়েছিল। নিষ্কাশিত দ্রবণটি একটি নিম্ন-চাপের বাষ্পীভবনকারী ব্যবহার করে ফিল্টার এবং ঘনীভূত করা হয়েছিল। −80 °C তাপমাত্রায় ফ্রিজে শুকানোর পরে A. lappa নির্যাসের ফলন 44.69% ছিল। A. lappa-এর ক্রোমাটোগ্রাফিক বিশ্লেষণ 1260 InfinityⅡ HPLC-সিস্টেম (Agilent, Pal Alto, CA, USA) ব্যবহার করে সংযুক্ত HPLC দিয়ে পরিচালিত হয়েছিল। ক্রোমাটোলিক পৃথকীকরণের জন্য, EclipseXDB C18 কলাম (4.6 × 250 মিমি, 5 µm, Agilent) 35 °C তাপমাত্রায় ব্যবহার করা হয়েছিল। নমুনার মোট 100 মিলিগ্রাম 50% মিথানলের 10 মিলিতে মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 10 মিনিটের জন্য সোনিকেটেড করা হয়েছিল। নমুনাগুলি 0.45 μm সিরিঞ্জ ফিল্টার (Waters Corp., Milford, MA, USA) দিয়ে ফিল্টার করা হয়েছিল। মোবাইল ফেজ কম্পোজিশন ছিল 0.1% ফসফরিক অ্যাসিড (A) এবং অ্যাসিটোনিট্রাইল (B) এবং কলামটি নিম্নরূপে এলিউট করা হয়েছিল: 0–60 মিনিট, 0%; 60–65 মিনিট, 100%; 65–67 মিনিট, 100%; 67–72 মিনিট, 0% দ্রাবক B যার প্রবাহ হার 1.0 মিলি/মিনিট। 10 μL ইনজেকশন ভলিউম ব্যবহার করে 210 nm এ বর্জ্য পদার্থ পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। বিশ্লেষণটি তিনটি প্রতিলিপিতে করা হয়েছিল।
২.৩. পশু আবাসন ও ব্যবস্থাপনা
৫ সপ্তাহ বয়সী পুরুষ স্প্রেগ-ডাওলি (SD) ইঁদুর এবং ৬ সপ্তাহ বয়সী পুরুষ ICR ইঁদুর সামতাকো বায়ো কোরিয়া (গিওংগি-ডো, কোরিয়া) থেকে কেনা হয়েছিল। প্রাণীদের একটি ঘরে স্থির তাপমাত্রা (২২ ± ২ °সে) এবং আর্দ্রতা (৫৫ ± ১০%) এবং ১২/১২ ঘন্টার হালকা/অন্ধকার চক্র ব্যবহার করে রাখা হয়েছিল। পরীক্ষা শুরু হওয়ার আগে এক সপ্তাহেরও বেশি সময় ধরে প্রাণীদের অবস্থার সাথে পরিচিত করা হয়েছিল। প্রাণীদের খাদ্য এবং জলের সরবরাহ ছিল। গ্যাচন বিশ্ববিদ্যালয়ে (GIACUC-R2019003) পশুর যত্ন এবং পরিচালনার জন্য বর্তমান নীতিগত নিয়মগুলি সমস্ত প্রাণীর পরীক্ষামূলক পদ্ধতিতে কঠোরভাবে অনুসরণ করা হয়েছিল। গবেষণাটি তদন্তকারী-অন্ধ এবং সমান্তরাল পরীক্ষামূলকভাবে ডিজাইন করা হয়েছিল। আমরা প্রাণী পরীক্ষামূলক নীতিশাস্ত্র কমিটির নির্দেশিকা অনুসারে ইচ্ছামৃত্যু পদ্ধতি অনুসরণ করেছি।
২.৪. এমআইএ ইনজেকশন এবং চিকিৎসা
ইঁদুরগুলিকে এলোমেলোভাবে ৪টি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল, যথা শ্যাম, কন্ট্রোল, ইন্ডোমেথাসিন এবং এ. লাপ্পা। ২% আইসোফ্লোরেন O2 মিশ্রণ দিয়ে চেতনানাশক হিসেবে ইঁদুরগুলিকে ৫০ μL MIA (৪০ মিলিগ্রাম/মি; সিগমা-অ্যালড্রিচ, সেন্ট লুইস, MO, USA) ব্যবহার করে হাঁটুর জয়েন্টগুলিতে ইনট্রা-আর্টিকুলারভাবে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল যাতে পরীক্ষামূলক OA হয়। চিকিৎসাগুলি নিম্নরূপ পরিচালিত হয়েছিল: নিয়ন্ত্রণ এবং শ্যাম গ্রুপগুলিকে শুধুমাত্র AIN-93G মৌলিক খাদ্যের সাথে বজায় রাখা হয়েছিল। শুধুমাত্র, ইন্ডোমেথাসিন গ্রুপকে AIN-93G খাদ্যের সাথে ইন্ডোমেথাসিন (৩ মিলিগ্রাম/কেজি) অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল এবং A. লাপ্পা ৩০০ মিলিগ্রাম/কেজি গ্রুপকে A. লাপ্পা (৩০০ মিলিগ্রাম/কেজি) এর সাথে পরিপূরক AIN-93G খাদ্যের সাথে বরাদ্দ করা হয়েছিল। OA ইনডাকশনের দিন থেকে প্রতিদিন প্রতি ১৯০-২১০ গ্রাম শরীরের ওজনের জন্য ১৫-১৭ গ্রাম হারে ২৪ দিন ধরে চিকিৎসা চালিয়ে যাওয়া হয়েছিল।
২.৫. ওজন বহন পরিমাপ
OA ইনডাকশনের পর, নির্ধারিত সময়সূচী অনুসারে ইনক্যাপাসিটিন্স-মিটারটেস্টার৬০০ (IITC লাইফ সায়েন্স, উডল্যান্ড হিলস, CA, USA) ব্যবহার করে ইঁদুরের পিছনের অঙ্গগুলির ওজন বহন ক্ষমতা পরিমাপ করা হয়েছিল। পিছনের অঙ্গগুলির ওজন বন্টন গণনা করা হয়েছিল: ওজন বহন ক্ষমতা (%)
